細(xì)菌蛋白提取試劑盒（100次）  貨號(hào)：RTD8101

● 產(chǎn)品組份及規(guī)格

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

細(xì)菌蛋白提取試劑盒使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白提取。提取過程中不需進(jìn)行超聲破碎等復(fù)雜的操作步驟，有效避免了外源蛋白的污染。該試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑PMSF，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行IP、Western blot實(shí)驗(yàn)；提取體系中不含EDTA，可直接通過Ni-NTA 等純化填料進(jìn)行蛋白純化。該試劑盒既可適用于小量蛋白表達(dá)檢測(cè)，也適用于大量蛋白的表達(dá)純化試驗(yàn)。

每次提取使用1ml 緩沖液計(jì)算，該試劑盒可以使用100次。

●    貯存條件：

試劑組份按照溫度貯存，可保存 12個(gè)月。

●    使用方法：

1. 8,000 rpm常溫離心 3 min 后，棄上清，盡量棄除殘余培養(yǎng)基，留取管底部菌體。

2. 即用型提取緩沖液配制：每ml 提取緩沖液中加入10 μl PMSF，10 μl 溶菌酶，1 μl DNase I，混勻后4℃貯存?zhèn)溆谩?b>注：該緩沖液現(xiàn)用現(xiàn)配，不建議貯存。

3. 按照原菌液1/2-1/5體積加入即用型提取緩沖液，即2-5 ml菌液收集的菌體加入1 ml 提取緩沖液，用吸頭吹打至無可見細(xì)胞團(tuán)塊，重懸菌體。

4. 20-37℃孵育 15-20 min，期間輕彈離心管數(shù)次以加速裂解。

注：若蛋白表達(dá)量較低，建議結(jié)合超聲破碎，置冰上后，采用300w，10s 超聲/10s 間隔，超聲20min，至菌液變清亮。

5. 裂解完成后 13,000rpm4℃離心5 min，將上清（上清中即為可溶性蛋白）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，直接進(jìn)行下一步純化或檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

6. 蛋白提取物分裝后建議-80℃保存。

實(shí)驗(yàn)示例：