PCR反應(yīng)試劑盒 ( 2000bp )
貨號：RTC3105
● 簡介：
本試劑盒包含完成PCR反應(yīng)所需全部試劑，可進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的教學(xué)和科研。其中模板為質(zhì)粒DNA；引物為根據(jù)質(zhì)粒DNA序列設(shè)計(jì)的上、下游引物；2×Taq
PCR MasterMix包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑。使用時，只需補(bǔ)加實(shí)驗(yàn)所需的引物和模板后即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，可最大限度的減少人為誤差，具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。使用本試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)后，PCR產(chǎn)物大小應(yīng)為2000bp。
● 貯存：-20℃。有效期一年。
● 包裝：20次
● 試劑盒組成：
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組成
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濃度
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體積
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模板
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10
ng/μl
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30
μl
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上游引物（2000
FW）
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10
μM
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30
μl
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下游引物（2000
RV）
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10
μM
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30
μl
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2×Taq
PCR MasterMix(含染料)
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-
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2×500
μl
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去離子水
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-
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1
ml
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● 實(shí)驗(yàn)步驟：
1.
冰浴中徹底融化模板，引物和2×Taq
PCR MasterMix，混勻后快甩離心將溶液收集到管底。
2.
按照下表在0.2ml
PCR管中制備反應(yīng)體系：
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50μl反應(yīng)體系
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上游引物（2000FW） 10μM
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1 μl
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下游引物（2000RV） 10μM
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1 μl
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模板
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1 μl
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2×Taq
PCR MasterMix
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25 μl
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水
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22 μl
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3.
快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4.
PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話，補(bǔ)加25μl礦物油。
5.
PCR儀上執(zhí)行以下程序：
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步驟
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溫度
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時間
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循環(huán)數(shù)
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初始變性
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94℃
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5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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30
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退火
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54℃
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30 sec
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延伸
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72℃
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2 min
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最后延伸
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72℃
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5 min
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1
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6. 反應(yīng)完成后，取5ml反應(yīng)液，1％瓊脂糖凝膠電泳，觀察條帶情況。