Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

● 產(chǎn)品組成：

●  產(chǎn)品簡介：

脯氨酸(Proline，Pro)是一種環(huán)狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，易溶于水。在正常環(huán)境情況下脯氨酸含量較低，但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發(fā)生反應(yīng)，能產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物，以分光光度計測定處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。

該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量，不適用于動物及醫(yī)療樣品中脯氨酸的測定。

按照一次使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可以使用50次。

● 自備材料：

植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度計或酶標(biāo)儀；水浴鍋或干浴器；離心機

● 操作步驟：

1、 樣本處理：

取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液（注意是否已經(jīng)加入無水乙醇）的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000 rpm離心 2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存?zhèn)溆?。待測提取液如不能及時測定，應(yīng)置于-20℃保存，1-2天內(nèi)穩(wěn)定。

2、 配制系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：

取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液的小管中，混勻后徹底溶解，即配成的Pro標(biāo)準(zhǔn)液（100mg/ml）。

取1 μl 100mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 樣品測定:

= 1 \* GB3 ① 分光光度計測定：參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液，依次加入試劑：

③ 水浴煮沸或干浴20分鐘，間歇混勻。加熱時務(wù)必注意避免液體暴沸濺出，可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。

④ 冰浴或流水冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鐘，如發(fā)現(xiàn)沒有不溶物，也可以不離心。 

⑤ 取上清，用空白管作為對照，取1ml反應(yīng)混合液用分光光度計測定520nm吸光度值。

= 6 \* GB3 ⑥ 酶標(biāo)儀測定：參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液，依次加入試劑：

 5、 計算：

以系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)(1-8號管)含量(μg)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定管的吸光度進(jìn)而計算其脯氨酸含量。

如使用分光光度計測定，根據(jù)如下公式計算具體樣品中脯氨酸的含量：

植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5（C×V_T）/(W×V_S) =3C/W

V_T=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)，此處為1ml

W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

V_S=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)，本實驗為0.5ml

1.5系數(shù)為步驟4中反應(yīng)混合液體積為1.5ml，取1ml測定吸光值